脾單核細胞分離實驗

簡要描述：脾單核細胞分離實驗是達為科生物細胞平臺的基礎服務項目之一，由專業(yè)的實驗技術(shù)人員操作完成。

更新時間：2022-12-22
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詳細介紹

脾單核細胞分離實驗操作方法：

采用頸椎脫臼法處死小鼠，于75%的酒精中浸泡10-15min；
在無菌超凈臺內(nèi)分離脾臟，放入PBS溶液（按照1：50的比例加入雙抗）中清洗2遍；
將清洗后的脾臟組織轉(zhuǎn)移至離心管中，加入適量的RMPI-1640培養(yǎng)基，用剪刀將其剪碎成糜狀；
將剪碎后的組織經(jīng)200目的濾網(wǎng)過濾，得到脾細胞懸液；
另取一個離心管，先加入與細胞懸液等量體積的淋巴細胞分離液，之后將細胞懸液輕輕加到離心管的淋巴細胞分離液上層（注意45度傾斜沿管壁滴加，一定要緩慢否則懸液沉下去導致分層界面不明顯）；
3000rpm離心10min，離心完畢后吸取中間白膜層即為脾單個核細胞；
3000rpm離心10min，加入RMPI-1640培養(yǎng)基進行洗滌一次；
用紅細胞裂解液去除紅細胞；3000rpm離心10min，再次用RMPI-1640培養(yǎng)基進行洗滌一次；
洗滌結(jié)束后，所得細胞沉淀用RMPI-1640培養(yǎng)基重懸后進行細胞計數(shù)。

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