甲基化檢測BSP

簡要描述：甲基化檢測BSP：用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。

更新時間：2022-12-23
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甲基化檢測BSP/MSP法
DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的重要研究內(nèi)容之一，它可以抑制基困的表達(dá)。甲基化通常發(fā)生在胞嘧啶的C5位，形成5-甲基胞嘧啶(5mC)，甲基化的胞密啶多位于CpG島上。DNA甲基化在人的正常發(fā)育、X染色體失活、衰老以及許多人類疾病(如發(fā)育畸形、癌癥、心血管疾病、糖尿病和神經(jīng)心理失調(diào)等)過程中發(fā)揮重要作用，已經(jīng)成為表觀遺傳學(xué)和表觀基因組學(xué)的重要研究內(nèi)容。該方法為甲基化檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，可定量檢測基因甲基化水平?；蚪MDNA經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后，設(shè)計BSP引物擴(kuò)增目的片段，然后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆并選取10個轉(zhuǎn)化子序列，即可確定所研究的CpG區(qū)域的甲基化頻率。目前，基因的甲基化研究主要結(jié)合亞硫酸氫鈉處理和PCR技術(shù)，分為甲基化特異性PCR和硫化測序PCR。

甲基化檢測BSP：甲基化的胞嘧啶在亞硫酸氫鈉發(fā)生脫氨基后不會轉(zhuǎn)變，用一對持異性引物擴(kuò)增后測序，再與DNA原始序列比對確定甲基化位點(diǎn)。測序法克服了只能針對單個位點(diǎn)檢測，并且這些位點(diǎn)必須是限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)的缺點(diǎn)，可以對任何基因序列的甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測。

實(shí)驗(yàn)服務(wù)：包含DNA抽提，引物設(shè)計合成，亞硫酸鹽處理，反應(yīng)。每個反應(yīng)可以檢測50bp左右，可以特定目的區(qū)域。

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