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簡要描述:細(xì)胞MTT實(shí)驗(yàn):MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。
詳細(xì)介紹
MTT法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長的方法。MTT為黃色化合物,是一種接受氫離子的染料,可作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈,在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素C的作用下,外源性MT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚( Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm(參比波長630m)波長處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MT結(jié)晶形成的量與活細(xì)胞數(shù)成正比。
注意事項(xiàng):
MTT法只能用來檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力。在用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的時(shí)候,為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性,MTT 吸光度在0-0.7 范圍內(nèi)。
MTT一般現(xiàn)用現(xiàn)配,過濾后4℃避光保存兩周內(nèi)有效,或配制成5mg/ml保存在-20℃長期保存,避免反復(fù)凍融,小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。
MTT有致癌性,用的時(shí)候注意防護(hù),配成的MTT需要無菌。
配制MTT時(shí)用PBS溶解,也有人用生理鹽水配,60℃水浴助溶。
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