番紅-固綠染色（軟骨）在涉及關節(jié)軟骨及軟骨下骨的形態(tài)學研究中，常需要聯(lián)合使用多種染料以顯示其組織學結構。其中，起源于上世紀60年代的番紅O-固綠染色因可以直觀反映關節(jié)軟骨、軟骨下骨和骨組織的結構而備受青睞。

軟骨組織由軟骨細胞和軟骨基質組成，軟骨組織及其周圍的軟骨膜構成軟骨。軟骨根據(jù)基質內(nèi)所含纖維素成分不同分為透明軟骨、彈性軟骨、纖維軟骨。軟骨染色方法有很多種，例如甲苯胺藍法、阿利新藍法、番紅O法等。番紅O-固綠軟骨染色法的染色原理在于嗜堿性的軟骨與堿性染料番紅O結合呈現(xiàn)紅色，嗜酸性的骨和酸性染料固綠結合而呈綠色或藍色，與呈現(xiàn)紅色的軟骨對比鮮明，從而將軟骨組織與骨組織區(qū)分開。通過圖像分析軟件可對番紅O染色的軟骨基質進行定量分析。

番紅-固綠染色步驟：
（1）骨組織固定、脫鈣，制成石蠟切片；

（2）切片常規(guī)脫蠟至水；

（3）入新鮮配制的Weigert染液染色；

（4）流水沖洗；

（5）酸性乙醇分化液分化；

（6）蒸餾水洗；

（7）在固綠染色液內(nèi)浸染；

（8）蒸餾水洗；

（9）入番紅O染液內(nèi)浸染；

（10）蒸餾水洗；

（11）用乙酸溶液洗滌切片，以便去除殘留的固綠，再用蒸餾水洗；

（12）分別用95%乙醇，無水乙醇脫水；

（13）二甲苯透明，中性樹脂封固；

（14）鏡檢。

染色結果：軟骨基質深紅色，軟骨細胞核藍色，細胞漿、肌肉、膠原纖維及骨組織呈灰綠色。