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簡要描述:天狼猩紅染色:偏振光鏡檢查,膠原纖維有正的單軸雙折射光的屬性,與天狼星紅復合染色液結合后,可增強雙折射,提高分辨率,從而區(qū)分兩型膠原纖維。
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基本原理和用途
天狼猩紅染色是一種用于組織學的染色技術,它利用強酸性染料天狼猩紅與膠原纖維中的堿性基團反應,使膠原纖維特異性地著染為猩紅色。這種染色方法
主要用于區(qū)分不同類型的膠原纖維,如I型和II型膠原纖維,在偏振光顯微鏡下可以進一步區(qū)分這些膠原纖維的類型。
此染色在研究各種組織病變時對膠原纖維異常或纖維增生的組織中具有重要的應用價值。
實驗步驟和染色結果的解讀
脫蠟至水:將石蠟切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、二甲苯Ⅲ中各5分鐘,以去除切片上的石蠟。接著,將切片依次放入無水乙醇、95%乙醇、75%乙醇中各1分鐘,最后用蒸餾水洗5分鐘。這一步驟的目的是使切片逐漸從有機溶劑過渡到水溶性環(huán)境,為后續(xù)染色做好準備。
2. 鐵蘇木素染色:在切片上滴加鐵蘇木素染液,染色時間為5-10分鐘,以染出細胞核。然后用蒸餾水洗去多余的染色液,時間約為10-20秒。隨后,
用自來水洗5分鐘,以進一步清除殘留的染色液。
3. 染色:在切片上滴加天狼猩紅染液,染色時間為15-30分鐘,以染出膠原纖維。然后,用流水稍沖洗,去除切片表面的染液。
4. 脫水透明:將切片依次放入75%乙醇、95%乙醇、無水乙醇中各1分鐘,進行脫水處理。再將切片放入二甲苯中3次,每次1-2分鐘,以達到透明效果。
5. 封片觀察:使用中性樹膠對切片進行封固。然后,在光學顯微鏡下觀察染色結果,膠原纖維呈紅色,細胞核呈棕褐色到黑色,肌纖維呈黃色。如有必要,可在 偏振光鏡下觀察,以區(qū)分不同類型的膠原纖維。
注意事項和實驗技巧
在進行天狼猩紅染色時,需要注意kuweisuan天狼猩紅染液的使用,因為kuweisuan具有一定的毒性,操作時應采取適當?shù)姆雷o措施。此外,由于染色
可能容易掉色,應及時封片以保持染色效果。在染色過程中,染色時間可能需要根據(jù)實驗結果進行調(diào)整,以獲得最佳的染色效果。
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