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實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞樣品試劑、試劑盒RNA提取試劑盒熒光定量PCRMixTRIZOLdNTP氯仿逆轉(zhuǎn)錄酶MMLV異丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2瓊脂糖溴化乙錠MOPS甲醛乙酸鈉EDTAEB溴酚蘭儀器、耗材離心管離心機(jī)風(fēng)光光度計(jì)電泳槽凝膠板RealtimePCR儀一、樣品RNA的抽提1.取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。2.兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃...

ELISA實(shí)驗(yàn)因靈敏度高，特異性強(qiáng)在生物科研上得到了廣泛的認(rèn)可，但對(duì)初學(xué)者而言，如不注意實(shí)驗(yàn)操作過程中的各個(gè)環(huán)節(jié)，可能會(huì)對(duì)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生比較大的影響，比如實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)白板，顯色弱靈敏度低，花板無梯度背景高等現(xiàn)象。下面對(duì)以上實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行一一解析。1.白板現(xiàn)象在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中所有孔的顏色均為無色，即無信號(hào)呈現(xiàn)。出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：試劑已過保質(zhì)期，不同批次稀釋液交叉使用。錯(cuò)加漏加檢測(cè)A，檢測(cè)B或者底物溶液TMB。洗板或者加樣過程中，酶標(biāo)記物被污...

吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。但本法對(duì)細(xì)胞核和寄生蟲著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更清晰，而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較差?；痉桨笇?shí)驗(yàn)材料原位雜交玻片試劑、試劑盒吉姆薩染色液磷酸鈉緩沖液乙醇二甲苯儀器、耗材染色盤培養(yǎng)箱濾紙實(shí)驗(yàn)步驟1.將顯影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盤中。（1）1個(gè)盤：pH6.810mmol/l磷酸鈉緩沖液，所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。（2）3個(gè)盤：水。（3）脫水系列溶液：①3個(gè)盤：分別盛50%、70%和95%乙醇。②2個(gè)盤：盛有...

蛋白提取組織樣本總蛋白提取（小鼠肝組織）1、頸椎脫臼處死小鼠，75%乙醇擦拭皮膚，剪開腹腔，剪切肝臟組織。2、平皿中放入6ml預(yù)冷0.9%NaCL。3、稱取0.6g左右肝組織，在平皿中剪碎組織，并轉(zhuǎn)移到勻漿器。4、預(yù)冷裂解液中添加PMSF（20ug/2ml）。5、取2ml預(yù)冷裂解緩沖液，迅速加入勻漿器，冰浴條件下充分研磨。6、組織研磨液轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管。7、4℃，15000rpm，離心10min。8、取上清組織蛋白粗提取液至新的1.5ml離心管。9、進(jìn)行蛋白定量，-80...

1.對(duì)于貼壁細(xì)胞或細(xì)胞涂片PBS洗滌一次。2.如果細(xì)胞貼得不牢，可以干燥樣品使細(xì)胞貼得更牢。3.用4%多聚甲醛固定細(xì)胞15分鐘，用PBS洗滌一次。4.將切片移入濕盒中加入新鮮配制的3%雙氧水,以去除內(nèi)源性過氧化物酶封閉液，室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗；5.滴加正常山羊血清封閉液，室溫30分鐘，甩去多余液體；6.滴加一抗工作液，37℃孵育2h（或4℃過夜），然后PBS充分淋洗；7.滴加兔/鼠二抗工作液，室溫孵育1h，PBS充分淋洗；8.DAB顯色5-10分鐘，在顯微鏡下掌握...

一般使用辣根過氧化物酶HRP-ECL發(fā)光法或堿性磷酸酶AP-NBT/BICP顯色法。1．HRP-ECL發(fā)光法：將A、B發(fā)光液按比例稀釋混合。膜用去離子水稍加漂洗，濾紙貼角吸干，反貼法覆于A、B混合液滴上，熄燈至可見淡綠色熒光條帶（5min左右）后濾紙貼角吸干，置于保鮮膜內(nèi)固定于片盒中，迅速蓋上膠片，關(guān)閉膠盒，根據(jù)所見熒光強(qiáng)度曝光。取出膠片立即*浸入顯影液中1～2min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片*定影，清水沖凈晾干，標(biāo)定Marker，進(jìn)行分析與掃描。2．AP-NBT/B...

目的：研究楊梅苷對(duì)大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法：60只SD大鼠隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性給藥組(維拉帕米100μg/L)和楊梅苷低中高劑量組(2.5,5,10mg/L),每組10只。釆用Langendorff離體心臟灌流技術(shù),停灌30min,再灌45min,造成心肌缺血再灌注損傷模型。記錄楊梅苷對(duì)心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的影響,測(cè)定冠脈流出液中心肌三酶LDH、CK、AST的水平,心肌組織中抗氧化酶SOD、CAT的活性及脂質(zhì)過氧化物MDA的含量。HE...